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碱性磷酸酶染色液

点击次数：4108　日期：2019/6/12 14:38:34

碱性磷酸酶染色液

产品简介：

碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase，简称ALP或AKP)为一类磷酸酯酶，广泛分布于哺乳动物组织内，其活性所需最适pH9.2~9.8。此酶主要存在于物质交换活跃之处(细胞膜)，如肠上皮和肾近曲小管的刷状缘、附睾上皮之静纤毛、肝的毛细胆管膜以及微动脉和毛细血管动脉部之内皮，还见于内质网、高尔基复合体、吞饮小泡、肠上皮之溶酶体、中性粒细胞之中性颗粒以及平滑肌之细胞膜。

碱性磷酸酶染色液(偶氮偶联法)不是采用金属沉淀法来显示碱性磷酸酶活性，而是采用偶氮偶联法(又称同时偶联法)，其原理是在pH9.2～9.8的碱性条件下细胞内碱性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸盐水解，释放出磷酸与萘酚，后者与偶联重氮盐生成有色产物，定位于细胞质中，该染液可用于血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、梯度入水后的石蜡切片等的碱性磷酸酶染色, 碱性磷酸酶活性部位呈蓝色，位于胞桨，结果较金属盐沉淀法可靠。

产品组成：

产品		3*10ml	3*20ml	Storage
试剂(A):ALP固定液		100ml	20ml	RT 避光
试剂(B): ALP 孵育液	B1:AS-BI染色液	3*2ml	5*2ml	-20℃避光
试剂(B): ALP 孵育液	B2:FBB染色液	5ml	10ml	4℃避光
临用前，按 B1:B2=1:1 比例混合，即为 ALP 孵育液，即配即用。
试剂(C):核固红染色液		10ml	20ml	4℃避光
使用说明书	1份

自备材料：

1、载玻片、湿盒

2、显微镜

3、4%多聚甲醛固定液(备选)

操作步骤(仅供参考)：

1、血液、骨髓或细胞涂片、冰冻切片、石蜡切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蜡切片无需固定)，水洗。

2、滴加配制好的 ALP 孵育液，放入湿盒中避光孵育15～20min，水洗。

3、入核固红染色液复染 3～5min。

4、水洗、镜检或甘油明胶封固后镜检。

(二) 贴壁培养细胞

1、取6孔板或其他容器培养的细胞，弃液，PBS清洗干净。

2、加4%多聚甲醛固定10～20min，PBS 清洗。

3、滴加配制好的ALP孵育液，放入湿盒中避光孵育15～20min，PBS清洗。

4、入核固红染色液复染0.5～3min。

5、PBS 清洗、镜检。

染色结果：

ALP 活性部位	蓝色
细胞核	红色(核固红)或绿色(甲基绿)

血液、骨髓涂片结果判断：

一般以积分报告结果，根据100个中性粒细胞阳性颗粒进行 0～4+计分。

细胞分值	染色特点
0	无颗粒
1	稍有颗粒
2	中等程度颗粒
3	多数颗粒
4	充满颗粒

临床意义：

1、类白血病反应积分明显增高，未经治疗的慢性粒细胞白血病积分明显减低。

2、急性细菌性感染积分明显增高，病毒性感染积分多正常或减低。

3、再生障碍性贫血积分常增高，PNH、MDS 积分常减低。

注意事项：

1、AS-BI 染色液易失效，应避免反复冻融，临用前低温缓慢溶解，不可用温水或热水助溶。

2、ALP 孵育液易失效或降低阳性强度，即配即用，不宜久置。

3、血液或骨髓细胞涂片或其他样本均应新鲜，薄厚适宜，及时固定，否则会影响酶的活性。

4、培养细胞染色操作过程中，清洗、染色等步骤都应轻微，以免损伤或丢失细胞。

5、培养细胞或细胞爬片染色建议采用 4%多聚甲醛固定液，ALP 固定液更适用于血液或骨

髓细胞图片的固定，染色时间应根据具体细胞特性而异。

有效期：12个月有效。

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司

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